PCR ё реаксияи занҷири полимеразӣ як усулест, ки барои тақвият додани пайдарпаии ДНК истифода мешавад.Он бори нахуст дар солҳои 1980-ум аз ҷониби Кари Муллис таҳия шудааст, ки барои кори худ дар соли 1993 барандаи ҷоизаи Нобел дар бахши кимиё шуд.PCR биологияи молекулавӣ инқилоб кард, ки ба муҳаққиқон имкон дод, ки ДНК-ро аз намунаҳои хурд афзоиш диҳанд ва онро ба таври муфассал омӯзанд.
PCR як раванди се марҳила аст, ки дар як сикли термикӣ, мошине, ки метавонад ҳарорати омехтаи реаксияро зуд тағир диҳад, сурат мегирад.Се марҳила ин денатуратсия, таҳшин ва васеъшавӣ мебошанд.
Дар марҳилаи аввал, денатуратсия, ДНК-и дуқабата то ҳарорати баланд (одатан тақрибан 95 ° C) гарм карда мешавад, то пайвандҳои гидрогенро, ки ду риштаро бо ҳам нигоҳ медоранд, шикастанд.Дар натиҷа ду молекулаи якқатор ДНК ба вуҷуд меояд.
Дар қадами дуюм, гармкунӣ, ҳарорат то тақрибан 55 ° C паст карда мешавад, то ба праймерҳо имкон диҳанд, ки ба пайдарпаии иловагӣ дар ДНК-и якқатор пайваст шаванд.Праймерҳо қисмҳои кӯтоҳи ДНК мебошанд, ки барои мувофиқ кардани пайдарпаии таваҷҷӯҳи ДНК ҳадаф тарҳрезӣ шудаанд.
Дар марҳилаи сеюм, васеъшавӣ, ҳарорат тақрибан ба 72 ° C боло бурда мешавад, то ба полимеразаи Taq (як намуди полимеразаи ДНК) имкон диҳад, ки риштаи нави ДНК аз праймерҳо синтез кунад.Полимеразаи Taq аз бактерияе гирифта шудааст, ки дар чашмаҳои гарм зиндагӣ мекунад ва қодир ба ҳарорати баланди дар PCR истифодашаванда тобовар аст.
Пас аз як давраи PCR, натиҷа ду нусхаи пайдарпаии ДНК-и мақсаднок аст.Бо такрор кардани се марҳила барои як қатор давраҳо (одатан 30-40), шумораи нусхаҳои пайдарпаии ДНК-и мақсаднок метавонад ба таври экспоненсиалӣ зиёд карда шавад.Ин маънои онро дорад, ки ҳатто миқдори ночизи ДНК-и ибтидоӣ метавонад афзоиш ёбад, то миллионҳо ва ҳатто миллиардҳо нусхаҳоро тавлид кунад.
PCR дар таҳқиқот ва ташхис барномаҳои зиёде дорад.Он дар генетика барои омӯзиши вазифаи генҳо ва мутатсияҳо, дар криминалистика барои таҳлили далелҳои ДНК, дар ташхиси бемориҳои сироятӣ барои муайян кардани мавҷудияти патогенҳо ва дар ташхиси пеш аз таваллуд барои ташхиси ихтилоли генетикӣ дар ҳомила истифода мешавад.
ПТР инчунин барои истифода дар як қатор вариантҳо мутобиқ карда шудааст, ба монанди PCR-и миқдорӣ (qPCR), ки имкон медиҳад миқдори ДНК чен карда шавад ва PCR транскрипсияи баръакс (RT-PCR), ки метавонад барои тақвият додани пайдарпаии РНК истифода шавад.
Сарфи назар аз барномаҳои зиёди он, PCR маҳдудиятҳо дорад.Он дониши пайдарпайии мақсаднок ва тарҳрезии праймерҳои мувофиқро талаб мекунад ва он метавонад ба хатогӣ дучор шавад, агар шароити реаксия дуруст оптимизатсия карда нашавад.Бо вуҷуди ин, бо тарҳрезӣ ва иҷрои бодиққати таҷрибавӣ, PCR яке аз воситаҳои пурқувват дар биологияи молекулавӣ боқӣ мемонад.
Вақти фиристодан: феврал-22-2023